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唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(椰毒假單胞菌酵米面亞種)的檢驗



錄入時間:2020-9-9 14:14:47 來源:網絡搜索

  今年8月,廣東省一家腸粉店發生食物中毒,11名顧客吃了店內河粉后,出現嘔吐、腹瀉等癥狀。經調查,這起食物中毒的罪魁禍首是“椰毒假單胞菌”,中毒原因是因為某些菌株可以產生一種叫“米酵菌酸”的毒素,一旦吃了含有這種毒素的食物,就會表現為惡心、嘔吐、腹瀉、頭暈、全身無力,嚴重時會出現黃疸、肝腫大、皮下出、嘔血、驚厥抽搐等癥狀,最嚴重的會出現休克甚至死亡。

  “椰毒假單胞菌”,全稱椰毒假單胞酵米面亞種Pseudomonas cocovenenans subsp.Farinofermentans,是—種存在于酵米面、變質鮮銀耳及其他淀粉類發酵產品中的食源性致病菌。

  由于椰毒假單胞酵母菌酵米面亞種不是國際公開發表和承認的細菌分類科學名稱,1999年劃分為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Burkholderiagladioli的一個病原型,目前現行標準GB/T 4789.29-2003《食品衛生微生物學檢驗椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗》。2018年9月國家衛生健康委員會發布的《食品安全國家標準食品微生物學檢驗唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(椰毒假單胞菌酵米面亞種)檢驗(征求意見稿)》中,將該菌進行更名,同時新增分離培養基mPDA同PCFA用于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(椰毒假單胞菌酵米面亞種)的分離。

 

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢驗流程圖


 

一、前增菌以及選擇性分離過程

前增菌:

淀粉類食品25g+225mLGVC增菌液,均質混勻,36土1℃,24-48h。

鮮銀耳1g+20mL GVC增菌液,均質混勻,36土1℃,24-48h。

分離:

用直徑3mm的接種環取增菌液一環,分別劃線接種于mPDA平板和PCFA平板,36℃±1℃培養24 h~48 h。觀察各個平板上生長的菌落。

mPDA平板

PCFA平板

 24-48h,紫色、光滑、濕潤、邊緣整齊

培養48h后,部分菌落中心可有凸起呈草帽狀

  24-48h,灰白色,光滑、濕潤、邊緣整齊 

二、初篩實驗

  自選擇性瓊脂平板上分別挑取5個以上典型或可疑菌落,分區劃線卵黃瓊脂平板,36℃±1℃培養。

  挑取培養18~24 h的菌落進行革蘭氏染色及氧化酶試驗。對于革蘭氏染色陰性、氧化酶試驗陰性的菌繼續培養至48 h±2 h。

  對于卵磷脂酶陽性,帶有虹彩環的單個菌落,接種PDA平板,36℃±1℃培養24 h±2 h。

 

卵黃瓊脂(卵磷脂酶試驗)

   

PDA平板

培養24h后,菌落2mm~3mm,表面光滑、濕潤,培養48h后,菌落周圍形成乳白色混濁環,斜射光下可見菌落及周圍培養基表面呈虹彩現象。

(通常需培養3-4d才看到明顯特征)

36土1℃,24-48h,菌落灰白或乳白色,光滑,邊緣整齊,中心有凸起,呈草帽狀。


三、生化試驗

  從純培養的PDA平板上挑取菌苔進行生化鑒定。唐菖蒲伯克霍爾德氏菌生化特征見下表?蛇x擇生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統。


生化試驗

特 征

O/F 試驗(氧化型)

+

葡萄糖

+

果糖

+

木糖

+

半乳糖

+

蔗糖

-

阿拉伯糖

+

甘露醇

+

側金盞花醇

+

肌醇

+

衛茅醇

+

動力

+

卵磷脂酶

+

氧化酶

-

尿素

+

明膠液化

+

硝酸鹽還原

+

檸檬酸鹽利用

+

精氨酸

+

石蕊牛乳

+

靛基質

-

V-P

-

MR

-

苯丙氨酸脫氨酶

-

H2S 產生

-

注:+表示陽性;-表示陰性。

 

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢驗用培養基列表

用途

貨號

名稱

規格

增菌

HB8591 GVC增菌液

250g

分離

HB9153 改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂(mPDA)

250g

HB9153a 氯霉素溶液

1ml*5支

HB9153b 龍膽紫溶液 1ml*5支
HB9140 PCFA培養基 250g
HB9140a PCFA培養基添加劑 1ml*5支

初篩

HB0262 卵黃瓊脂培養基基礎 250g
HB8295 50%卵黃乳液 5ml*10支
HB2100 氧化酶試紙 10片
HB8278 革蘭氏染色液 5ml*8

純化

HB0233 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 250g

產毒培養

HB0233-2 馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂 250g

生化鑒定

GB049 OF生化管 20支
GB117 葡萄糖 20支
GB144-1 果糖 20支
GB032 木糖 20支
GB152 半乳糖 20支
GB163 阿拉伯糖 20支
GB169 蔗糖 20支
  側金盞花醇 20支
GB007 甘露醇 20支
GB105 肌醇 20支
GS008 衛茅醇 20支
GB008 半固體瓊脂 20支
GS004 尿素 20支
SN039 明膠生化管 20支
SN047 硝酸鹽還原 20支
GS011 西蒙氏枸櫞酸鹽 20支
  精氨酸 20支
HB8801 石蕊牛奶培養基 250g
GS001 蛋白胨水 20支
GS003 MR-VP生化管 20支
GB095 苯丙氨酸脫氨酶 20支
GB095a 苯丙氨酸指示劑 5ml*4
GB065 硫化氫 20支

 

 

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